DNA-Extraktion durch Spooling-Methode

DNA-Extraktion durch Spooling-Methode

DNA

DesoxyribonukleinsĂ€ure und Proteine. Die DNA ist in Einheiten organisiert, die Gene genannt werden, von denen jedes fĂŒr eine bestimmte RNA oder Proteinsequenz kodiert. Gene werden untersucht, um ĂŒber biologische Struktur und Funktion, Evolution, Krankheit und viele andere Aspekte lebender Systeme zu lernen. Um Gene im Detail zu untersuchen, muss die DNA aus interessierenden Zellen isoliert und gereinigt werden.

DNA-Extraktion

Obwohl DNA aus einer einzelnen Zelle extrahiert und untersucht werden kann, reicht es nicht aus, mit bloßem Auge zu sehen. Um eine fĂŒr das Spooling ausreichende Menge zu erhalten, mĂŒssen Sie umso mehr Zellen verwenden, je besser (viele Millionen).

Exakte Protokolle variieren betrĂ€chtlich, um die einzigartigen Eigenschaften spezifischer Proben zu berĂŒcksichtigen, aber die allgemeinen Schritte sind Homogenisierung, Lyse, Aufschluss, Trennung und Sammlung. Das Verfahren wird am besten in einer kleinen (je nach GrĂ¶ĂŸe der Probe) Glas- oder Kunststoffröhre durchgefĂŒhrt.

Eine Probe wird im Allgemeinen gemischt oder zermahlen, um die Zellen grĂŒndlich voneinander zu trennen. Dies macht die Zellbestandteile fĂŒr die folgenden Reagenzien zugĂ€nglicher. Detergenz oder Enzyme werden dann zu dem Homogenat gegeben, um die Zellmembranen (und Nuklearmembranen, wenn die Zellen eukaryotisch sind) zu lysieren, um die DNA zu befreien. An diesem Punkt ist die DNA von Proteinen, Lipiden, Kohlenhydraten umgeben - alles andere, was in den Zellen enthalten war.

Eine weitere enzymatische Verdauung kann notwendig sein, um Proteine ​​abzubauen, so dass sie nicht an DNA binden und deren Sammlung stören. Die DNA wird durch Zugabe von kaltem, reinem Ethyl- oder Isopropylalkohol vom Rest des Zellinhalts getrennt. DNA ist in diesen Alkoholen nicht löslich, so dass es kondensiert, um zu versuchen, seinen Kontakt mit dem Alkohol zu minimieren. Die kondensierte DNA wird dann gesammelt, ĂŒblicherweise durch Zentrifugieren --- oder Spoolen.

DNA-Spulung

Die DNA-Sammlung durch Spooling ist wirksam, wenn eine große Menge DNA aus einem Extraktionsverfahren erhalten wird. Es ist auch eine ausgezeichnete Demonstrationsmethode, da ein beeindruckendes Gewirr von reiner DNA deutlich sichtbar ist.

Um die DNA zu spulen, muss der Trennungsschritt sorgfĂ€ltig durchgefĂŒhrt werden. Wenn es sich nicht um einen Teil der zuvor zugesetzten Lysereagensmischung handelt, muss eine konzentrierte Salzlösung (Natriumchlorid) vor dem Alkoholzugabeschritt zu der Lösung zugegeben werden. Der kalte Alkohol wird langsam ĂŒber die Seite des Teströhrchens gegossen, um eine Schicht ĂŒber der wĂ€ssrigen Lösung zu bilden, wobei ein Vermischen vermieden wird. Wenn es richtig gemacht wird, bildet der Alkohol eine eigene Schicht ĂŒber der salzigen Schicht. Dann kommt das Spoolen.

Um die DNA von der salzigen Schicht zu sammeln, legen Sie vorsichtig einen GlasrĂŒhrstab durch die Alkoholschicht, bis sie den Boden des Röhrchens berĂŒhrt. Drehe den Stab langsam zwischen den Fingern und beobachte dabei die GrenzflĂ€che zwischen den beiden Schichten. Wenn genĂŒgend DNA vorhanden ist, wird es an der GrenzflĂ€che zwischen den Schichten zu einer milchig-durchscheinenden Masse verklumpen. Drehen Sie den Stab, um die DNA um ihn herum zu wickeln (das ist der Spulteil) und ziehen Sie ihn aus dem Röhrchen. Die DNA kann zur Aufbewahrung oder weiteren Analyse in eine andere Röhre reinen Alkohols ĂŒberfĂŒhrt werden.

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