Die Nachteile von Western Blotting

Western Blotting ist eine sehr n├╝tzliche Technik, aber es ist nicht ohne Nachteile.

Western Blotting ist eine der h├Ąufigsten Methoden in biochemischen Labors. Im Grunde trennt es Proteine ÔÇőÔÇővon einer Probe nach Gr├Â├če und testet dann mit Hilfe von Antik├Ârpern, ob ein bestimmtes Protein vorhanden ist. Es ist nicht nur in der Forschung n├╝tzlich, sondern auch in medizinischen oder diagnostischen Labors; Tests f├╝r sowohl HIV- als auch Lyme-Borreliose umfassen zum Beispiel einen enzymgekoppelten Immunadsorptionstest (ELISA), gefolgt von einem Western-Blot, wenn der ELISA-Test positiv ist. Trotz seiner Popularit├Ąt hat Western Blotting jedoch einige Nachteile.

Nicht quantitativ

Klassische Western-Blots sind nicht quantifizierbar. Mit anderen Worten, w├Ąhrend sie den Forschern sagen k├Ânnen, ob ein bestimmtes Protein vorhanden ist, erm├Âglichen sie es nicht, zu quantifizieren, wie viel Protein vorhanden ist. Einige Biotech-Unternehmen verkaufen jetzt Kits, mit denen Forscher oder Labortechniker die Menge an vorhandenem Protein mithilfe einer Standardkurve quantifizieren k├Ânnen - dies funktioniert jedoch nur, wenn reine Proben des gleichen Proteins verf├╝gbar sind. Dar├╝ber hinaus kann das Molekulargewicht eines Proteins nur mit Western-Blotting bestimmt werden, anstatt genau wie bei der Massenspektrometrie bestimmt zu werden.

Antik├Ârper

Ein Western-Blot kann nur durchgef├╝hrt werden, wenn prim├Ąre Antik├Ârper gegen das Protein von Interesse verf├╝gbar sind. W├Ąhrend Antik├Ârper f├╝r viele verschiedene Proteine ÔÇőÔÇővon Biotech-Firmen erh├Ąltlich sind, sind sie nicht billig; Wenn f├╝r ein gegebenes Protein keine prim├Ąren Antik├Ârper verf├╝gbar sind, wird es nicht m├Âglich sein, einen Western-Blot auf der Suche nach diesem bestimmten Protein durchzuf├╝hren. Dar├╝ber hinaus wollen die Forscher m├Âglicherweise herausfinden, ob ein Protein in irgendeiner Weise modifiziert wurde - ob es phosphoryliert wurde (zum Beispiel hatte es eine Phosphatgruppe) - und mit der Western-Blot-Technik Antik├Ârper, die spezifisch f├╝r das modifizierte sind Eiwei├č.

Ausbildung

Es kann schwierig sein, einen Western Blot richtig durchzuf├╝hren und gute Ergebnisse zu erzielen, daher muss das Personal gut ausgebildet sein. In diesem wie in vielen anderen ist Erfahrung vielleicht der beste Tutor; Selbst f├╝r einen erfahrenen Techniker ist ein Western Blot jedoch zeitaufwendig. Der Gelelektrophoreseteil des Experiments wird zum Beispiel typischerweise ein bis zwei Stunden dauern. Andere Aufgaben k├Ânnen nat├╝rlich ausgef├╝hrt werden, w├Ąhrend das Gel l├Ąuft, aber das Experiment ben├Âtigt noch einige Zeit, um Ergebnisse zu erzielen.

Andere Einschr├Ąnkungen

Antik├Ârper k├Ânnen manchmal eine Off-Target-Bindung aufweisen, was zu schlechteren Ergebnissen f├╝hren kann. Dar├╝ber hinaus verwenden Sie beim Western-Blot einen Antik├Ârper gegen ein bestimmtes Protein, so dass Ihre Ergebnisse nur anzeigen, ob dieses Protein vorhanden war. Die hochaufl├Âsende Massenspektrometrie hingegen zeigt alle in einer Probe vorhandenen Proteine ÔÇőÔÇőund ist im Gegensatz zum klassischen Western-Blotting quantitativ. Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass die Massenspektrometrie im Vergleich zum Western-Blotting viel teurer und auch technisch anspruchsvoller ist.

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