Die Nachteile von Western Blotting

Western Blotting ist eine sehr n√ľtzliche Technik, aber es ist nicht ohne Nachteile.

Western Blotting ist eine der h√§ufigsten Methoden in biochemischen Labors. Im Grunde trennt es Proteine ‚Äč‚Äčvon einer Probe nach Gr√∂√üe und testet dann mit Hilfe von Antik√∂rpern, ob ein bestimmtes Protein vorhanden ist. Es ist nicht nur in der Forschung n√ľtzlich, sondern auch in medizinischen oder diagnostischen Labors; Tests f√ľr sowohl HIV- als auch Lyme-Borreliose umfassen zum Beispiel einen enzymgekoppelten Immunadsorptionstest (ELISA), gefolgt von einem Western-Blot, wenn der ELISA-Test positiv ist. Trotz seiner Popularit√§t hat Western Blotting jedoch einige Nachteile.

Nicht quantitativ

Klassische Western-Blots sind nicht quantifizierbar. Mit anderen Worten, w√§hrend sie den Forschern sagen k√∂nnen, ob ein bestimmtes Protein vorhanden ist, erm√∂glichen sie es nicht, zu quantifizieren, wie viel Protein vorhanden ist. Einige Biotech-Unternehmen verkaufen jetzt Kits, mit denen Forscher oder Labortechniker die Menge an vorhandenem Protein mithilfe einer Standardkurve quantifizieren k√∂nnen - dies funktioniert jedoch nur, wenn reine Proben des gleichen Proteins verf√ľgbar sind. Dar√ľber hinaus kann das Molekulargewicht eines Proteins nur mit Western-Blotting bestimmt werden, anstatt genau wie bei der Massenspektrometrie bestimmt zu werden.

Antikörper

Ein Western-Blot kann nur durchgef√ľhrt werden, wenn prim√§re Antik√∂rper gegen das Protein von Interesse verf√ľgbar sind. W√§hrend Antik√∂rper f√ľr viele verschiedene Proteine ‚Äč‚Äčvon Biotech-Firmen erh√§ltlich sind, sind sie nicht billig; Wenn f√ľr ein gegebenes Protein keine prim√§ren Antik√∂rper verf√ľgbar sind, wird es nicht m√∂glich sein, einen Western-Blot auf der Suche nach diesem bestimmten Protein durchzuf√ľhren. Dar√ľber hinaus wollen die Forscher m√∂glicherweise herausfinden, ob ein Protein in irgendeiner Weise modifiziert wurde - ob es phosphoryliert wurde (zum Beispiel hatte es eine Phosphatgruppe) - und mit der Western-Blot-Technik Antik√∂rper, die spezifisch f√ľr das modifizierte sind Eiwei√ü.

Ausbildung

Es kann schwierig sein, einen Western Blot richtig durchzuf√ľhren und gute Ergebnisse zu erzielen, daher muss das Personal gut ausgebildet sein. In diesem wie in vielen anderen ist Erfahrung vielleicht der beste Tutor; Selbst f√ľr einen erfahrenen Techniker ist ein Western Blot jedoch zeitaufwendig. Der Gelelektrophoreseteil des Experiments wird zum Beispiel typischerweise ein bis zwei Stunden dauern. Andere Aufgaben k√∂nnen nat√ľrlich ausgef√ľhrt werden, w√§hrend das Gel l√§uft, aber das Experiment ben√∂tigt noch einige Zeit, um Ergebnisse zu erzielen.

Andere Einschränkungen

Antik√∂rper k√∂nnen manchmal eine Off-Target-Bindung aufweisen, was zu schlechteren Ergebnissen f√ľhren kann. Dar√ľber hinaus verwenden Sie beim Western-Blot einen Antik√∂rper gegen ein bestimmtes Protein, so dass Ihre Ergebnisse nur anzeigen, ob dieses Protein vorhanden war. Die hochaufl√∂sende Massenspektrometrie hingegen zeigt alle in einer Probe vorhandenen Proteine ‚Äč‚Äčund ist im Gegensatz zum klassischen Western-Blotting quantitativ. Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass die Massenspektrometrie im Vergleich zum Western-Blotting viel teurer und auch technisch anspruchsvoller ist.

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